Molekulární diagnostika odpovídá souboru molekulárních technik, jejichž cílem je identifikovat změny v DNA, které by mohly například naznačovat genetická onemocnění nebo rakovinu. Molekulové techniky se navíc široce používají pro identifikaci a potvrzení infekčních chorob, protože představují rychlejší a přesnější metodu diagnostiky.
Molekulární diagnostika je nákladná, a proto ji lékaři často nevyžadují, poskytuje však přesné výsledky, pokud jde o přítomnost změny, způsob, jakým může narušit fungování organismu a reakci pacienta na léčba.
K čemu to je
Molekulární diagnostika může být prováděna s několika cíli, z nichž hlavní jsou:
- Identifikace mutací souvisejících s leukémií, jako je například identifikace translokace BCR-ABL, která je charakteristická pro chronickou myeloidní leukémii (CML); charakteristické mutace hematologických onemocnění, jako je hereditární hemochromatóza, polycythemia vera, esenciální trombocytémie a trombofilie Molekulární změny, které indikují výskyt rakoviny, jako je například kolorektální karcinom, karcinom plic, prsu a mozku, kromě identifikace viru HPV diagnostikují infekční onemocnění, jako je hepatitida, uretritida, toxoplasmóza, leishmanióza atd.
Molekulární diagnostika, i když je považována za nákladnou ve srovnání s jinými diagnostickými technikami, je přesnější, protože je schopna informovat o změně související s určitým onemocněním a o míře vlivu této změny v těle, a tak pomáhá léčbě člověka.
Kromě toho, že se používají k diagnostice různých nemocí, používají se molekulární techniky také k hodnocení reakce na léčbu, zejména u lidí s rakovinou, což je jedna z nejúčinnějších metod pro indikaci progrese a relapsu nemoci.
Jak se to dělá
Molekulární diagnostika může být provedena s jakýmkoli vzorkem, na žádost lékaře, který může nejlépe poskytnout informace o stavu pacienta, kterým může být moč, slina nebo ve většině případů krev. Není potřeba půst ani jiná příprava na zkoušku.
Vzorek se odebere a zašle do laboratoře spolu s pokyny lékaře informující o zkoušce nebo typu výzkumu, který by měl být proveden. Provedená molekulární technika závisí na požadované zkoušce a zahrnuje řadu přesných postupů, jejichž cílem je identifikovat přítomnost nebo nepřítomnost změny požadované lékařem.
Obvykle se používá pouze malé množství odeslaného vzorku, zbytek se uloží tak, aby se zkouška v případě potřeby opakovala.
Podívejte se, jaké jsou hlavní molekulární techniky
PCR
PCR, zkratka pro polymerázovou řetězovou reakci nebo polymerázovou řetězovou reakci , je molekulární technika, která spočívá v amplifikaci fragmentu genetického materiálu, buď DNA nebo RNA, s cílem identifikace mutací, a tedy pomoci při diagnostice onemocnění.
Tato technika se provádí extrakcí a čištěním genetického materiálu, který se potom umístí do směsi, ve které je jednou ze složek restrikční enzym, který se mění podle požadovaného zkoumání a jehož funkcí je rozřezat materiál na fragmenty aby bylo možné identifikovat možnou genetickou změnu. Směs se umístí do termocykleru, což je zařízení, které působí prostřednictvím teplotní změny uvedené odborníkem podle zkoušky a umožňuje tak amplifikaci genetického fragmentu. V případě konvenční PCR je produkt PCR po amplifikaci podroben elektroforéze, což je molekulární technika založená na hmotnosti a velikosti fragmentů, tj. Podle těchto charakteristik je generován pásový vzor, jehož analýza je provedena na základě pozitivního kontrolního pruhu, tj. pruhu, o kterém je známo, že odpovídá genetické změně.
Real-time PCR, také nazývaná qPCR, je typem kvantitativní PCR, to znamená, že kromě identifikace genetické alterace je schopna poskytnout informace o genové expresi, tj. O tom, kolik modifikovaného genu je v organismu exprimováno. lze jej tedy použít k podpoře diagnostiky a sledování léčby. Real-time PCR nevyžaduje elektroforézu, celý proces amplifikace a analýzy genetického materiálu se provádí pomocí zařízení a výsledek je interpretován vyškoleným zdravotníkem.
Sekvenování
Sekvenování je molekulární technika, která spočívá ve stanovení sekvence DNA nukleotidů, které jsou formujícími jednotkami genetického materiálu. K sekvenování dochází při reakci podobné PCR, avšak v amplifikační směsi jsou modifikované nukleotidy přidány přidáním fluorochromů, které, jak je materiál amplifikován, jsou modifikované nukleotidy začleněny do DNA a vytvářejí několik fragmentů, které odpovídají produktu pro sekvenování.
Reakční produkt je umístěn do zařízení zvaného DNA sekvencer, ve kterém, jakmile jsou fragmenty dosaženy laserem zařízení, jsou fluorochromy excitovány a emitují fluorescenci, která je indikována zařízením pomocí píku, přičemž každý pík odpovídá na nukleotid. Na konci reakce bude zařízení informovat o sekvenci DNA, takže bude schopno pomoci lékaři při diagnostice genetických chorob.
