Elektroforéza: co to je, k čemu slouží a jak se to dělá

Elektroforéza je laboratorní technika prováděná s cílem separovat molekuly podle jejich velikosti a elektrického náboje, aby bylo možné stanovit diagnózu nemoci, ověřit expresi proteinu nebo identifikovat mikroorganismy.

Elektroforéza je jednoduchý a levný postup, který se používá v laboratorní rutině a ve výzkumných projektech. Podle účelu elektroforézy může být například nutné provést další testy a zkoušky, aby se dosáhlo diagnózy.

K čemu to je

Elektroforéza může být prováděna pro různé účely, jak ve výzkumných projektech, tak v diagnostice, protože jde o jednoduchou a nízkonákladovou techniku. Elektroforéza tedy může být provedena:

• Identifikujte viry, houby, bakterie a parazity, nejčastější je tato aplikace ve výzkumných projektech; Test otcovství; Zkontrolujte expresi proteinů; Identifikujte mutace, které jsou užitečné například při diagnostice leukémie; Analyzujte typy cirkulujícího hemoglobinu, užitečné při diagnostice srpkovité anémie; Zhodnoťte množství bílkovin přítomných v krvi.

Podle účelu elektroforézy může být pro dokončení diagnózy nezbytné provést u lékaře další doplňkové testy.

Jak se to dělá

K provedení elektroforézy je kromě gelu UV nebo LED, známého také jako transiluminátor, nezbytný gel, který může být z polyakrylamidu nebo agarózy v závislosti na objektivu, elektroforetickém pufru a kádě, markeru molekulové hmotnosti a fluorescenčním barvivu.

Po přípravě gelu je nutné umístit specifický předmět tak, aby se jamky vytvořily v gelu, populárně nazývané hřeben, a nechal se gel usadit. Když je gel připraven, naneste látky do jamek. Za tímto účelem musí být do jedné z jamek umístěn marker molekulové hmotnosti, pozitivní kontrola, což je látka, která je známa, co to je, negativní kontrola, která zaručuje platnost reakce, a vzorky, které mají být analyzovány. Všechny vzorky musí být smíchány s fluorescenčním barvivem, protože je tak možné vizualizovat pruhy na transiluminátoru.

Gel se vzorky musí být umístěn do elektroforézní vany, která obsahuje specifický pufrovací roztok, a poté je zařízení zapnuto tak, aby byl přítomen elektrický proud a následně i potenciální rozdíl, který je důležitý pro separaci částice podle jejich zatížení a velikosti. Elektroforetická doba chodu se liší podle účelu postupu a může trvat až 1 hodinu.

Po stanovené době je možné zobrazit výsledek elektroforetického běhu přes transiluminátor. Když je gel umístěn pod UV nebo LED světlem, je možné vizualizovat pruhovací vzorec: čím větší je molekula, tím menší je její migrace, přibližuje se ke studni, zatímco čím je molekula lehčí, tím větší migrační potenciál.

Aby byla reakce validována, musí být pruhy pozitivní kontroly vizualizovány a na negativní kontrole nesmí být nic vizualizovány, protože jinak je to indikace, že došlo ke kontaminaci, a celý proces musí být opakován.

Druhy elektroforézy

Elektroforéza může být prováděna pro různé účely a podle svého účelu může být použito několik typů gelů, z nichž nejčastější jsou polyakrylamid a agaróza.

Elektroforéza k identifikaci mikroorganismů je běžnější ve výzkumných laboratořích, avšak pro diagnostické účely může být elektroforéza použita k identifikaci hematologických onemocnění a chorob, které se vyvíjejí se zvyšováním množství proteinů, což jsou hlavní typy elektroforézy.:

1. Hemoglobinová elektroforéza

Hemoglobinová elektroforéza je laboratorní technika prováděná k identifikaci různých typů hemoglobinu cirkulujícího v krvi, což umožňuje identifikovat přítomnost onemocnění souvisejících s syntézou hemoglobinu. Typ hemoglobinu je identifikován elektroforézou při specifickém pH, ideálně mezi 8, 0 a 9, 0, přičemž je ověřen vzorec pruhů, který lze porovnat s normálním vzorcem, což umožňuje identifikaci přítomnosti abnormálních hemoglobinů.

K čemu se to dělá: Elektroforéza hemoglobinu se provádí za účelem vyšetřování a diagnostiky nemocí souvisejících s syntézou hemoglobinu, jako je srpkovitá anémie a nemoc hemoglobinu C, kromě toho, že je užitečná při diferenciaci thalassémie. Naučte se, jak interpretovat elektroforézu hemoglobinu.

2. Proteinová elektroforéza

Elektroforéza na proteinech je zkouška, kterou požaduje lékař k posouzení množství proteinů cirkulujících v krvi, a tedy k identifikaci nemocí. Tento test se provádí ze vzorku krve, který se odstředí, aby se získala plazma, přičemž část krve sestává mimo jiné z bílkovin.

Po elektroforéze je možné vizualizovat vzor pruhů a následně graf, ve kterém je uvedeno množství každé frakce proteinů, což je pro diagnostiku zásadní.

K čemu se to dělá: Proteinová elektroforéza umožňuje lékaři vyšetřit výskyt mnohočetného myelomu, dehydrataci, cirhózu, zánět, onemocnění jater, pankreatitidu, lupus a hypertenzi podle vzoru proužku a grafu uvedeného ve zprávě o vyšetření.

Pochopit, jak se to dělá a jak chápat výsledek elektroforézy proteinů.